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双抗体夹心法属于哪一类检测方法_双抗体夹心法测抗原操作步骤详解

时间:2024-11-15 08:28:00 点击:81 次

双抗体夹心法属于哪一类检测方法

双抗体夹心法是一种典型的免疫学检测方法,属于间接竞争性酶联免疫吸附试验(ELISA)的一种。该方法利用两种不同的抗体,将待检测的抗原夹在中间,通过酶标记的抗体检测夹心复合物的信号来确定抗原的存在和含量。下面将详细介绍双抗体夹心法测抗原的操作步骤。

1. 准备试剂和样品

在开始实验之前,需要准备好所需要的试剂和样品。试剂包括酶标记的抗体、捕获抗体、酶底物和缓冲液等。样品可以是血清、尿液、细胞上清液、组织匀浆等,其中含有待检测的抗原。

2. 涂布捕获抗体

将捕获抗体溶液均匀涂布在酶标板的孔内,并在4℃下保存过夜,使其充分吸附在酶标板上。

3. 加入样品和酶标记的抗体

将样品加入到已涂布的酶标板孔中,与捕获抗体结合。接着加入酶标记的抗体,与待检测抗原形成夹心复合物。

4. 洗涤

将酶标板孔中的液体倒出,用洗涤缓冲液洗涤孔内的残余物质,太阳城游戏去除非特异性结合的物质。

5. 加入酶底物

将酶底物加入到孔中,与酶标记的抗体结合,使其产生颜色反应。反应时间一般为10-30分钟。

6. 停止反应

加入停止剂停止反应,防止酶底物继续反应,使反应停止。孔内的颜色反应与抗原的浓度成正比。

7. 读板分析

将酶标板放入酶标仪中,测定各孔的吸光度值,根据标准曲线计算出待检测样品中抗原的浓度。

双抗体夹心法是一种灵敏度高、特异性强的免疫学检测方法,可以应用于多种生物样品中抗原的检测。该方法的操作简单,易于批量化,被广泛应用于生物医学、环境监测、食品安全等领域。